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蛋白質(zhì)測(cè)定儀法測(cè)定蛋白質(zhì)的步驟以及優(yōu)缺點(diǎn)

更新時(shí)間:2013-05-30      點(diǎn)擊次數(shù):3126

凱氏定氮法測(cè)定蛋白質(zhì)的步驟以及優(yōu)缺點(diǎn)
      蛋白質(zhì)在生物體內(nèi)是非常重要的,參與幾乎所有的生命活動(dòng),它們不僅與新陳代謝、免疫和生物進(jìn)化有很大關(guān)系,而且還給人們提供很多信息。蛋白質(zhì)含量常作為衡量食品中營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高低的一項(xiàng)重要指標(biāo),因此蛋白質(zhì)含量的檢測(cè)在食品分析中尤為重要,一直以來(lái)都是研究的熱點(diǎn),特別是乳品行業(yè)。蛋白質(zhì)含量的測(cè)定可以使用
蛋白質(zhì)測(cè)定儀進(jìn)行快速的測(cè)定分析。蛋白質(zhì)測(cè)定儀則是根據(jù)凱氏定氮法這一經(jīng)典測(cè)定方法研制的。
      凱氏定氮法是國(guó)內(nèi)外普遍采用的測(cè)定食品或其他生物材料中含氮量的經(jīng)典方法,分為樣品消化、蒸餾和吸收、滴定3個(gè)步驟。其基本原理是:試樣與濃硫酸和催化劑一同消化破壞有機(jī)物,使其中的蛋白質(zhì)氮及其他有機(jī)氮轉(zhuǎn)化為氨態(tài)氮,然后與硫酸結(jié)合生成硫酸銨加入堿進(jìn)行蒸餾使氨逸出,用硼酸吸收后,再以酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定,測(cè)出含氮量。
      樣品的消化過(guò)程看似簡(jiǎn)單,但是自凱氏定氮法被發(fā)明至今128年以來(lái),雖然經(jīng)過(guò)不斷的努力加以改進(jìn),仍然存在耗時(shí)過(guò)長(zhǎng)和損耗較大的難題。Domini等采用微波和超聲輔助消化測(cè)定凱氏氮,經(jīng)典凱氏定氮法、超聲輔助和微波-超聲輔助的消化方法的消化時(shí)間分別為30、25、7min。金屬催化劑(例如Se)的使用可使消化時(shí)間縮短為30min。金屬鹽類(lèi)的使用可使消化時(shí)間縮短為2h。據(jù)所查資料,現(xiàn)在為止能達(dá)到的zui短消化時(shí)間為7min。然而,某些輔助消化試劑的應(yīng)用卻帶來(lái)毒性和造成環(huán)境污染的負(fù)面影響問(wèn)題。例如,消化產(chǎn)生的SO2會(huì)危害人體健康。另外一個(gè)問(wèn)題就是增加成本,例如,需要消耗試劑量大且有些催化劑價(jià)格較昂貴。除了消化時(shí)間以外,還有許多研究報(bào)道試圖減少消化過(guò)程中氮的損失。例如,汞作為催化劑會(huì)有干擾,它可與氨結(jié)合形成穩(wěn)定的化合物,所以在加入硫酸之前要將其分解。采用密閉消化,可有效地減少易揮發(fā)元素的損失,同時(shí)也減少了消化時(shí)間。
      氨的蒸餾過(guò)程中,傳統(tǒng)的蒸餾裝置操作不當(dāng)容易發(fā)生倒吸,且堿的加入量會(huì)影響蒸餾,過(guò)多會(huì)浪費(fèi)試劑,過(guò)少又會(huì)使蒸餾不*,從而造成誤差,所以在操作時(shí)需要注意。氨的滴定過(guò)程,傳統(tǒng)的方法采用混合指示劑對(duì)顏色變化進(jìn)行判斷滴定終點(diǎn),由于人對(duì)色彩辨別的差異,容易造成誤差。而現(xiàn)在多采用酸度計(jì)或電位滴定法相結(jié)合進(jìn)行測(cè)定,使滴定結(jié)果更準(zhǔn)確。
      由于經(jīng)典凱氏定氮法操作繁瑣、環(huán)境污染較大、蒸餾容易倒吸,自動(dòng)
定氮儀測(cè)定蛋白質(zhì)則克服了以上不足,采用自動(dòng)消化、蒸餾、滴定,操作簡(jiǎn)單,減少了環(huán)境污染,可大批量測(cè)定樣品,提高了工作效率。目前自動(dòng)定氮儀在牛乳、小麥、大米、大豆、食用菌、肉制品、調(diào)味料等中都得到廣泛應(yīng)用。但全自動(dòng)定氮儀價(jià)格昂貴,增加了前期投入。

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